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用于真菌的紙片擴散法藥物敏感實驗。

【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：改良真菌藥敏培養(yǎng)基
英文名稱：MHGMB Fungi AST agar medium
【包裝規(guī)格】
10個/包
【預(yù)期用途】
用于真菌的紙片擴散法藥物敏感實驗。
【儲存條件及有效期】
避光，2～8℃，有效期限為110天，具體詳見產(chǎn)品包裝上所示。對于其瓊脂平板，打開內(nèi)包裝后有效期為5天。
【樣本要求】
    分離純化的真菌菌株，選自念珠菌顯色培養(yǎng)基上或非選擇性馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基上孵育20～24 h的純化菌株，菌落特征典型。
【檢驗方法】 
1. 試驗應(yīng)嚴格遵守無菌操作， 防止微生物污染；
2. 接種物制備——直接菌落懸液法
1) 從孵育20～24 h的瓊脂平板（應(yīng)選用念珠菌顯色培養(yǎng)基上或非選擇性馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基）上挑取數(shù)個單個菌落，直接在3 mL的生理鹽水中制成菌懸液；
2) 調(diào)整菌懸液的濁度使其相當于0.5麥氏濃度[（1～2）×108CFU/mL]。肉眼觀察，應(yīng)在足夠的光線下，貼靠著有黑白相間粗線條的比色卡與0.5麥氏濃度標準管進行比較。
3. 接種平板
1) 平板的準備：35±2℃孵箱，平板正放，皿蓋半開，放置約20～30 min，使其恢復(fù)至室溫并使瓊脂表面冷凝水干掉；
2) 調(diào)整好菌懸液的濁度后好在15 min內(nèi)將無菌棉簽浸入菌懸液內(nèi)。緊貼試管內(nèi)壁在液體上方旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，除去棉簽上多余的液體；
3) 用拭子橫劃線接種整個表面干燥的瓊脂表面；然后再旋轉(zhuǎn)平板約60o，再次用拭子橫劃線接種；如此兩次，亦即從3個方向（60o）用棉簽劃線接種瓊脂表面，以確保每次接種均勻分布，后在瓊脂平板的邊緣涂抹一圈；
4) 蓋子可半開3～5 min，以使瓊脂吸收表面多余的水分，在15 min內(nèi)貼完藥敏試驗紙片。
4. 紙片在已接種的瓊脂平板上的位置
1) 將預(yù)先設(shè)定的一組抗菌藥物紙片分置在已接種細菌的瓊脂表面，每個紙片必須壓下以確保與瓊脂表面完全接觸，無論是單獨放置的紙片或有紙片分配設(shè)備，紙片必須分布均勻，兩紙片之間圓心的距離不少于24 ㎜。90 ㎜的平板放置不超過4個紙片。但對于一些藥物產(chǎn)生的抑菌環(huán)很大，在一個瓊脂板內(nèi)僅放置2～3個紙片。注意紙片距離瓊脂邊緣的距離同樣重要，無論有多少紙片，如果紙片放置得太靠近瓊脂的邊緣（≥10 ㎜），一些藥物的抑菌環(huán)可能會不完整，由于一些藥物幾乎是瞬間擴散的，一旦紙片與瓊脂表面接觸，就不能再移動，如位置不佳可在瓊脂的另一個位置重新放置一個紙片；
2) 在放置好紙片后15 min內(nèi)倒置瓊脂板并將它放置在35±2℃的孵箱中，需氧孵育20～24 h。
5. 平板的判斷
1) 經(jīng)過20～24 h的孵育后，檢查每個平板。如果平板的涂布令人滿意，接種正確，由此產(chǎn)生的抑制圈是均勻的圓形，并會有融合生長的菌苔。如果可見單個菌落，說明接種量過稀，必須重復(fù)試驗。測量完全抑制區(qū)的直徑（由肉眼來判斷），包括紙片的直徑。測量抑菌環(huán)至接近的整毫米數(shù)，采用游標卡尺或尺子在培養(yǎng)板的背面測量。將培養(yǎng)基放在一個黑色不反光的背景上并用反射的光照射。
2) 沒有肉眼可見的明顯的生長區(qū)即可認為抑制圈邊緣。在抑菌環(huán)邊緣的只能在放大鏡下觀察到的微小菌落的生長可以忽略不計。
3) 根據(jù)測量的抑菌圈直徑對照判讀標準進行判斷。

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